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一、HSVII ELISA試劑盒用途及檢測方法簡述

·單純性皰疹病毒(HSV)是一種普通的病原體，初期感染通常無癥狀。HSV有I型和Ⅱ型兩種*的血清免疫學(xué)類型。

·HSV I型感染者一般伴有口腔感染并損害腰部以上部位；HSVⅡ型與先天性感染有關(guān)并損害腰部以下部位。其初期臨床癥狀為：1．濕疹皰疹，伴有許多損害的濕疹性的皮膚改變；2．皰疹性齦炎；3．皰疹濃毒癥，僅見于新生的早產(chǎn)兒。

本試劑盒是一種檢測血清樣品HSVⅡ型特異抗體IgG的精確的血清學(xué)方法。

·把純化了的單純性皰疹病毒Ⅱ型抗原包被在微孔表面加入經(jīng)稀釋的患者血清樣品。若其中存在IgG，它與包被的抗原結(jié)合成為抗原—抗體復(fù)合物，用水洗去未結(jié)合物后加入底物和顯色劑，所產(chǎn)生顏色的強度與樣品中的抗體的量成正比。其結(jié)果通過酶標儀在平行檢測中與臨界校正液和對照品相比較而得出。

二、HSVII ELISA試劑盒試劑盒的組成

1．抗原包被的微孔板：96孔，1塊

2．酶聯(lián)試劑：12mL，1瓶，(紅色液體)

3．樣品稀釋液：22mL，1瓶，(綠色液體)

4．陰性對照：150μL，1瓶，(無色蓋)

5．臨界校正液：150μL，1瓶，(黃色蓋)

    HSVⅡIgG指數(shù)=1

6．陽性對照：150μL，l瓶，(紅色蓋)

7．洗滌濃縮液(20X)：50mL， 1瓶

8．TMB試劑(一步)：11mL，1瓶

9．終止液 (1N HCL) ：11ml,，1瓶

試劑盒的保存和穩(wěn)定性

1．試劑盒在2~8℃下保存。

2．微孔板保存在有干燥劑的密封袋中。

3．試劑盒在有效期內(nèi)是穩(wěn)定的。

4．試劑盒中的試劑在保存或使用期間，應(yīng)避免暴露在熱、陽光和強烈光線之中。

*警示與注意：

1．試劑盒的某些材料中可能含有潛在生物危險的組分，應(yīng)按微生物學(xué)和生物醫(yī)學(xué)實驗室有關(guān)生物安全的規(guī)定進行操作和處理。

2．本試劑盒僅適用于實驗室。

3．勿用嘴吸移液管；禁止在樣品和試劑盒試劑操作區(qū)吸煙、吃東西。

4．本試劑盒中的各組分是一個完整的單位，不同批號的試劑盒的組分不能混用。

5．本試劑盒試劑中含有防腐劑*。*會與鉛、銅形成爆炸性的金屬化合物。

處理：用大量水沖洗。

三、HSVII ELISA試劑盒樣品的采集和制備

1．采集血樣并分離血清；

2．采集的樣品在2~8℃下可保存7天。冰凍狀態(tài)下可保存6個月。血清樣品要避免反復(fù)凍融。

四、HSVII ELISA試劑盒的準備

1．稀釋的洗滌緩沖液的配制。按1：19的比例稀釋洗滌濃縮液(20X)，即50mL洗滌濃縮液(20X)用蒸餾水或去離子水稀釋至1升，已稀釋的洗滌緩沖液在2~8℃下可穩(wěn)定一個月，用前混合好。

2．使用前使全部樣品和試劑達到室溫(18~25℃下同)，并輕輕搖動。

五、HSVII ELISA試劑盒檢測步驟

1．從酶標板上拆下所需數(shù)量的板條，并固定在支架上。

2．按1：40稀釋待測樣品、陰性對照、陽性對照和臨界校正液。方法是將5μL上述樣品分別加入到200μL樣品稀釋液中，充分混勻。

3．取100μL稀釋的血清樣品、臨界校正液或?qū)φ掌芳尤氲较鄳?yīng)的微孔中。并取100μL樣品稀釋液加入到1A位置的微孔內(nèi)，作為空白對照。輕拍微孔架，去除液體中的氣泡并充分混勻。37℃下溫育30分鐘。

4．把全部微孔中的液體清除干凈后，用稀釋的洗滌緩沖液沖洗5次。

5．向每個微孔中加入100μL酶聯(lián)試劑，輕輕混合10